期刊简介
本刊坚持“四项基本原则”，坚持改革开放，坚持为社会主义精神文明建设和物质文明建设服务的宗旨，促进医学教育发展和医学科研进步，发现和培养青年科技工作者。
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- 杂志名称：济宁医学院学报杂志
- 主管单位：山东省教育厅
- 主办单位：济宁医学院
- 国际刊号：1000-9760
- 国内刊号：37-1143/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：期刊收录：上海图书馆馆藏, 万方收录(中), 知网收录(中), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏
利用CHO(dhfr-)细胞高效表达GM-CSF/Fcγ2-融合蛋白
宁金鹰；王尊荣；许佐良
关键词：融合蛋白, 转染, 基因表达, 细胞CHO(dhfr-)
摘要：目的利用二氢叶酸还原酶缺陷型细胞CHO(dhfr-)高效表达融合蛋白GM-CSF/Fcγ2-.方法利用脂质体基因转染技术,把含有融合基因GM-CSF/Fcγ2-的真核表达质粒pRc/CMV2/GM-CSF/Fcγ2-和含有二氢叶酸还原酶基因的真核表达质粒pSV2-dhfr共转染二氢叶酸还原酶缺陷型细胞CHO(dhfr-)中.用G418和撤除H、T(次黄嘌呤、胸腺嘧啶核苷)双筛选,获得dhfr+neo+双表型阳性的细胞克隆.取表达产量高的克隆进行亚克隆,并行MTX加压筛选,以提高表达量.用RT-PCR、ELISA和Western blot对表达产物进行鉴定并行MTT法检测表达蛋白的生物学活性.结果成功地表达出了具有GM-CSF生物学活性的融合蛋白GM-CSF/Fcγ2-.结论该方法可行,表达量达到15μg/ml.
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